SDS PAGE - Gel brakes during the running (Oct/06/2008 )

Hi

We've got the problem that our Gel (8% ) is braking during the run. today the front could run for 2cm longer.
the run : 120V ~2h or longer.

What could be the problem?

B

Please specify your problem, what do you mean by braking? It stops to run and the front won't reach the gel bottom? If this is the problem, you should check your gel system ("hardware") as well as your ionic conditions in the running buffer (enough salts?). Do you reuse your running buffer? Is your power pack working?

Ok. After 2h it looks like this:
[attachment=5395:Gel.jpg]

The run stopps because of the brake. Yes, we reuse the running buffer. NExt run on wednesday, I will make new buffer.

oh gar nich gesehen, bist ja auch aus Deutschland

Hi Bonni, Grüß zurück nach Deutschland. Aber für das Verständnis der anderen besser auf englisch. Nur kurz: Du meinst, dein Gel bricht (break) nicht bremsen (brake), ja? Das ausgefranste Stückchen unten? Passiert das wähend des Laufs oder beim Rausnehmen? Du solltest den Laufpuffer immer frisch verwenden, sonst bekommst du Probleme wegen der abnehmenden Ionenmenge, der Lauf wird immer langsamer. Und du hast Proteinverunreinigungen darin aus den früheren Läufen, die deine Gele sicher nicht besser aussehen lassen. 8% dürfte nicht brechen beim Lauf, aber es gibt Gel-strengthener, diedas Gel flexibler machen, schau mal bei Invitrogen, heißt Rhinohide, ich meine, das ist von denen. Das gibt man mit in die Gellösung und die Gele sind belastbarer. Erschwert allerdings deutlich den Blotvorgang, falls du blotten willst also lieber weglassen.

So, you mean your gel is breaking? Does this happen inside of the apparatus or when you put the gel outside? You should always use fresh running buffer, otherwise you will get impurities in your new gel and the run will take longer everytime due to ionic drain. There are some chemicals like Rhinohide, Gel-strengtheners, you can put these in your gel-solution and the gel will be more flexibel. But blotting afterwards is a problem, the proteins won't leave the gel...

Oh ja break!!

It's breaking during the run.

Thanks.

Results with fresh buffer on thursday.

Never reuse the running buffer.

Running buffer is cheap to make. It is not worth to reuse the buffer and ruin your experiment!

OK. Great gel. much faster and not breaked. Thanks

Congrats, you have done well! Na also, alles wird gut! Schönes Wochenende!